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    蛋白提取純化需要進(jìn)行哪些步驟操作?

    作者:admin 發(fā)布日期:2021/9/16 關(guān)注次數: 二維碼分享
    蛋白質(zhì)是包括人類(lèi)在內的各種生物有機體的重要組成成分,是生命的物質(zhì)基礎之一。生物體的生長(cháng)、發(fā)育、遺傳和繁殖等一切生命活動(dòng)都離不開(kāi)蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)是揭示生命活動(dòng)現象和分子生物學(xué)機理的重要研究對象。研究蛋白質(zhì)首要的步驟是將目的蛋白從復雜的大分子混合物中分離純化出來(lái),得到高純度具有生物學(xué)活性的目的物。因此,高效的純化技術(shù)和手段是蛋白質(zhì)研究的重要基礎和關(guān)鍵之一。

    那么蛋白提取純化需要進(jìn)行哪些步驟操作呢?分離純化某一特定蛋白質(zhì)的一般程序可以分為前處理、粗分離、精細分離三個(gè)步驟。
    1、前處理
    分離純化某種蛋白質(zhì),首先要把蛋白質(zhì)從原來(lái)的組織或細胞中以溶解的狀態(tài)釋放出來(lái)并保持原來(lái)的天然狀態(tài),不丟失生物活性。為此,動(dòng)物材料應先剔除結締組織和脂肪組織,種子材料應先去殼甚至去種皮以免受單寧等物質(zhì)的污染,油料種子最好先用低沸點(diǎn)的有機溶劑如乙醚等脫脂。然后根據不同的情況,選擇適當的方法,將組織和細胞破碎。

    動(dòng)物組織和細胞可用電動(dòng)搗碎機或勻漿機破碎或用超聲波處理破碎。植物組織和細胞一般需要用石英砂或玻璃粉和適當的提取液一起研磨的方法或用纖維素酶處理也能達到目的。細菌細胞的破碎比較麻煩,破碎細菌細胞壁的常用方法有超聲波破碎,與砂研磨、高壓擠壓或溶菌酶處理等。

    組織和細胞破碎后,選擇適當的緩沖液把所要的蛋白提取出來(lái)。細胞碎片等不溶物用離心或過(guò)濾的方法除去。

    如果所要的蛋白主要集中在某一細胞組分,如細胞核、染色體、核糖體或可溶性細胞質(zhì)等,則可利用差速離心的方法將它們分開(kāi),收集該細胞組分作為下步純化的材料。如果碰上所要蛋白是與細胞膜或膜質(zhì)細胞器結合的,則必須利用超聲波或去污劑使膜結構解聚,然后用適當介質(zhì)提取。

    2、粗分離
    當蛋白質(zhì)提取液(有時(shí)還雜有核酸、多糖之類(lèi))獲得后,選用一套適當的方法,將所要的蛋白與其他雜蛋白分離開(kāi)來(lái)。一般這一步的分離用超濾、鹽析、等電點(diǎn)沉淀和有機溶劑分級分離等方法。這些方法的特點(diǎn)是簡(jiǎn)便、處理量大,既能除去大量雜質(zhì),又能濃縮蛋白溶液。

    3、精細分離
    樣品經(jīng)粗分級分離以后,一般體積較小,雜蛋白大部分已被除去。進(jìn)一步純化,一般使用層析法包括離子交換層析、親和層析、疏水層析以及分子篩等。必要時(shí)還可選擇電泳法,包括區帶電泳、等電點(diǎn)聚焦等作為最后的純化步驟。用于細分級分離的方法一般規模較小,但分辨率很高。

    結晶是蛋白質(zhì)分離純化的最后步驟。盡管結晶過(guò)程并不能保證蛋白一定是均一的,但是只有某種蛋白在溶液中數量上占有優(yōu)勢時(shí)才能形成結晶。結晶過(guò)程本身也伴隨著(zhù)一定程度的純化,而重結晶又可除去少量夾雜的蛋白。由于結晶過(guò)程中從未發(fā)現過(guò)變性蛋白,因此蛋白的結晶不僅是純度的一個(gè)標志,也是斷定制品處于天然狀態(tài)的有力指標。

    成都眾質(zhì)過(guò)濾技術(shù)有限公司是一家專(zhuān)業(yè)從事膜分離技術(shù)的研究,主要生產(chǎn)四川提取液提純濃縮設備,四川酒水飲料澄清過(guò)濾設備,四川口服液澄清過(guò)濾設備和四川中藥口服液澄清過(guò)濾設備,如有需要可聯(lián)系電話(huà):18908220973.
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